上海瑞楚生物科技有限公司小編介紹,厭氧菌培養基(anaerobic media) 供厭氧菌的分離、培養和鑒別用的培養基,稱為厭氧菌培養基。由于厭氧菌自身缺乏有氧代謝所必需的各種酶,如細胞色素和細胞色素氧化酶、過氧化氫酶和過氧化物酶、超氧化歧化酶,所以造成自身代謝的缺陷,無法進行有氧代謝,而無氧酵解所產生的能量又不足,因此厭氧菌在正常的大氣環境下不能生長和生存。為使厭氧菌能正常生長,必須制備營養成分豐富,氧化還原電勢較低,具有特殊生長因子的專門用的培養基。雜質會影響培養基的成分,因此制備培養基時需要進行滅菌。二硫蘇糖醇溶液(DTT)
培養基的pH必須控制在一定的范圍內,以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的較適pH條件各不相同,一般來講,細菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內生長,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內生長。值得注意的是,在微生物生長繁殖和代謝過程中,由于營養物質被分解利用和代謝產物的形成與積累,會導致培養基pH發生變化,若不對培養基pH條件進行控制,往往導致微生物生長速度下降或(和)代謝產物產量下降。因此,為了維持培養基pH的相對恒定,通常在培養基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性,KH2PO4溶液呈酸性,兩種物質的等量混合溶液的pH為6.8。當培養基中酸性物質積累導致H+濃度增加時,H+與弱堿性鹽結合形成弱酸性化合物,培養基pH不會過度降低;如果培養基中OH-濃度增加,OH-則與弱酸性鹽結合形成弱堿性化合物,培養基pH也不會過度升高。Nitsch&Nitsch培養基培養基根據其組成、用途、酸堿度等不同因素分類,如營養瓊脂、LB培養基、麥康凱培養基等。
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在 CO2 培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織,需要用Eagle′s液,如果只是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時,需要注意一點:新配的培養基在經過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時,溶液的pH 還會向上浮動0.2左右。
合成培養基(synthetic medium) 由已知化學成分的營養物質組成的培養基。根據微生物對營養要求的不同,可完全由無機鹽或化合物組成,如:氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、維生素等,其組成成分已知,只要嚴格操作,各批次間質量可做到穩定一致。此培養基可用來檢測某種營養物或藥物對微生物代謝的影響。組織細胞培養液均屬合成培養基。合成培養基的成本較高,其價格相當于同類天然培養基的幾倍以至于幾十倍。只含幾種無機鹽的合成培養基,只適用于自養菌的培養,如培養亞硝化細菌、氧化硫桿菌等的培養基。有些培養基大部分成分為已知化學結構的營養物質,其中的個別或少數成分為未明化學成分的必須營養物,成為半合成培養基,如百日咳菌苗生產用的水解酪素培養基。黃色布氏菌芽孢桿菌常用的培養基為營養瓊脂平板培養基。
L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?L-谷氨酰胺(L-Glutamine)是細胞生長的必須氨基酸,可作為培養細胞的能量來源,參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中狀態不穩定,它的降解速率隨保存時間,保存溫度及保存環境pH值等變化而變化。L-丙胺酰-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine)是細胞培養中普遍使用的L-谷氨酰胺的替代品,其在水溶液中穩定性高,即可保持長時間穩定的營養供給,也降低了分解產物造成的細胞毒性。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液(L-alanyl-L-glutamineslution)可作為哺乳動物貼壁細胞或懸浮細胞培養添加劑。與谷氨酰胺相比,L-丙胺酰-谷氨酰胺不會自行降解成氨而導致細胞毒性,作為添加物培養條件更加可控,可有效提高細胞活力。培養基的配方也會受到環境、藥物和其他外部壓力的影響,因此,在實際應用中需要不斷進行調整和改進。改良桑塔基氏培養基基礎(含2.5%NaCl)
LB培養基是普遍使用的通用培養基,適用于大多數腸道菌和非腸道菌的培養。二硫蘇糖醇溶液(DTT)
鑒別培養基(differential media) 在培養基中加入某一反應底物和指示劑,以區別某些微生物的特性從而鑒別之。又分一般鑒別培養基和選擇性鑒別培養基。只用于區別不同微生物種類的培養基稱為-般鑒別培養基,此類培養基中一般不加抑菌劑而只含指示劑,如克氏雙糖鐵培養基,含有葡萄糖及乳糖,以酚紅作為指示劑,觀察培養基底層與斜面的顏色變化判定細菌對葡萄糖和乳糖的發酵能力,加人檸檬酸鐵銨,培養后觀察是否產生黑色沉著以判定細菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而產生硫化氫;又如伊紅-美藍瓊脂,含有乳糖(反應底物)、伊紅-美藍(指示劑)用以鑒別大腸埃希菌、腸道病原菌和其他雜菌。一般鑒別培養基的特點是在配方中都含有指示劑,并可用于區別不同種類的微生物,有些鑒別培養基也可同時作為細菌的特殊需要用來分離培養某些細菌,如胰酪胨大豆瓊脂和巧克力色血瓊脂。二硫蘇糖醇溶液(DTT)
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