長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結合形成難溶性復合物而產生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時,常需在培養基中加入少量螯合劑,避免培養基中產生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養基pH會發生改變(一般使pH降低),可根據所培養微生物的要求,在培養基滅菌前后加以調整。致病菌常用的培養基包括營養瓊脂平板培養基、馬鈴薯葡萄糖瓊培養基。木本植物用培養基添加劑
培養基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料,一般都含有水、氮源、無機鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、色素和血清等)等。培養基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質,因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),較長時間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內。由于液體培養基不易長期保管,均改制成粉末。K2培養基基礎含血清培養基是一種以動物血清為主的培養基普遍用于誘導細胞分化和胚胎發育研究等方面。
培養基的分類有幾種呢?上海瑞楚生物科技有限公司小編介紹,按培養基的物理狀態區分:1.液體培養基,80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養成分的培養基。2.固體培養基,一類配制成的固體狀態的基質。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。3.半固體培養基,指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態的培養基。4.脫水培養基,又稱預制干燥培養基,指含有除水分外的一切成分的商品培養基。
動物細胞培養必需的溶液,平衡鹽水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎溶液。PH調整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羥乙基哌嗪乙烷磺酸)細胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素,每毫升培養液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素:終濃度為50ug/ml培養液。3)制霉菌素:濃度25U/ml,小瓶分裝,每瓶一次用完。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清,前者來源少,價格高;后者要求剛產下尚未哺乳的小牛,因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質、氨基酸、葡萄糖等。蛋白質主要是白蛋白和球蛋白。培養基是一種供養分離的微生物和生物樣品的營養物質基質。
在培養基中加入 HEPES 有何好處?培養基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽,它可提供營養,但卻在生理 pH 條件下會降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強的緩沖劑,能使細胞培養基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強。HEPES溶液:是一種弱酸,中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸,主要作用是防止培養基pH迅速變動。在開放式培養條件下,觀察細胞時培養基脫離了 5%CO2 的環境,CO2 氣體迅速逸出,pH迅速升高,若加了HEPES,此時可以維持 pH7.0 左右。一般在進行克隆化培養時要添加HEPES。神經細胞原代培養的過程中能用到。培養基根據其組成、用途、酸堿度等不同因素分類,如營養瓊脂、LB培養基、麥康凱培養基等。硫化細菌培養基
化學制劑和生物制劑都可以用于制備培養基,例如氨基酸、蔗糖和酵母提取物。木本植物用培養基添加劑
按培養基的營養成分是否完全區分:1.基本培養基,亦稱“較低限度培養基”。只能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養基,稱為基本培養基,是含有營養要求較低成分的合成培養基,常用“[-]”表示。這種培養基往往缺少某些生長因子,所以經過誘變過的營養缺陷型菌株不能生長。2.完全培養基,基礎培養基添加血清等物質后,叫完全培養基,也叫(血清)細胞培養基。完全培養基可用來滿足微生物的各種營養缺陷型菌株的生長需要,常以“[+]”表示。3.補充培養基,凡是只能滿足相應的營養缺陷型生長需要的組合培養基,稱為補充培養基,它是在基本培養基中加入該菌株不能合成的營養因子而組成的。根據在基本培養基中加入的是A或B等營養因子代謝物而分別用[A]或[B]等來表示。木本植物用培養基添加劑
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