放入 PCR 儀:將配置好的反應管放入基因擴增儀 PCR 儀中,按照設定的程序進行擴增反應。設置擴增程序:一般包括預變性、變性、退火、延伸和終延伸等步驟。預變性步驟通常在 94℃-95℃下進行 5-10 分鐘,使 DNA 雙鏈充分解開;變性溫度一般為 94℃-95℃,時間為 30-60 秒,使模板 DNA 雙鏈解鏈;退火溫度根據引物的 Tm 值確定,一般在 50℃-65℃之間,時間為 30-60 秒,使引物與模板 DNA 特異性結合;延伸溫度通常為 72℃,時間根據擴增片段長度而定,一般為 1-2 分鐘 /kb;終延伸步驟在 72℃下進行 5-10 分鐘,確保所有擴增產物延伸完整。循環次數一般為 30-40 次。采用獨特的熒光檢測技術,能夠在PCR過程中實時監測熒光信號的變化,從而實現對DNA或RNA的定量分析。南京QPCR基因擴增儀PCR儀有哪些
啟動反應與結果分析確認參數無誤后,啟動 qPCR 程序,儀器自動運行并實時顯示熒光曲線。反應結束后,通過軟件查看結果:定量結果:根據標準曲線計算未知樣本的初始模板濃度(定量),或通過 ΔΔCt 法分析相對表達量(相對定量)。溶解曲線:若出現單一尖銳峰,說明擴增特異性良好;若有雜峰,需排查引物或反應條件問題。 污染防控(重點)核酸污染:嚴格分區操作:將試劑配制區、樣本處理區、PCR 擴增區分開,避免交叉污染。使用濾芯吸頭,每次加樣后更換吸頭,避免移液器接觸樣本或試劑瓶口。定期用 10% 次氯酸鈉或 DNA 酶清潔實驗臺面、移液器和儀器樣品槽,紫外燈照射消毒操作區(30 分鐘以上)。試劑污染:試劑分裝保存(避免反復凍融),陰性對照(無模板)和空白對照(無菌水)必須設置,以監測是否污染。無錫定性基因擴增儀PCR儀代理商RePure-(D)B具備多重安全保護功能,如過溫保護、斷電記憶等,確保實驗過程的安全。
PCR儀是利用聚合酶鏈式反應(PCR)技術,在體外對特定DNA片段進行大量擴增的儀器。其原理是通過高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期,循環進行,使目的DNA得以迅速擴增。具體過程如下:高溫變性:將待擴增的DNA雙鏈在高溫(90-95℃)下解鏈,形成單鏈DNA模板。低溫退火:降低溫度(一般為50-65℃),使引物與單鏈DNA模板特異性結合。適溫延伸:在DNA聚合酶的作用下,以引物為起始點,在適宜溫度(一般為72℃左右)下,以dNTP為原料,沿著模板鏈合成新的DNA鏈。
科研實驗室:優先選擇帶梯度功能的機型(如 Veriti、C1000),便于優化引物退火溫度。臨床檢測:選擇兼容熒光定量模塊的機型(如 QuantStudio),實現定性 + 定量一體化檢測。工業級批量檢測:選擇快速升降溫機型(如某些國產型號升降溫速率≥6℃/ 秒),縮短檢測周期。日常維護定期清潔熱蓋與反應槽,避免污染或液體殘留影響溫度傳導。使用** PCR 板 / 管,確保與儀器模塊緊密貼合(非適配耗材可能導致孔間溫度不均)。實驗優化高通量檢測時,建議使用熱啟動酶和定量加樣設備(如多通道移液器),減少非特異性擴增和加樣誤差。長時間運行后,定期用標準品驗證擴增效率(如使用已知濃度的 DNA 模板檢測 Ct 值重復性)。RePure-(D)B雙槽PCR操作簡便,具有易讀的液晶顯示屏和直觀的操作界面,方便用戶進行實驗操作。
PCR 儀的維護與注意事項:日常維護:定期清潔反應模塊,去除殘留試劑(如礦物油、PCR 產物),避免污染。校準溫度:使用標準溫度計驗證控溫精度,每年至少 1 次。操作注意:配置反應體系時需在冰上進行,防止引物或酶提前活化。避免頻繁開關儀器,減少溫控模塊損耗。實驗后及時進行模塊消毒(如用 75% 乙醇擦拭),防止交叉污染。PCR 儀的發展趨勢:便攜化與集成化:微流控芯片 PCR 儀將反應體系微型化,可實現 “樣本進 - 結果出” 的即時檢測(如 POCT 設備)。高通量與自動化:結合機器人工作站,實現從樣本提取到 PCR 擴增的全流程自動化,適用于大規模篩查。多功能整合:如與測序儀聯用,實現 “擴增 - 測序” 一體化,縮短基因分析周期。RePure-A即時獲取實時數據,增強了實驗的可控性和數據可靠性。江蘇定量基因擴增儀PCR儀電話
RePure-A的技術實力在不斷更新,科研人員在復雜研究中能獲得可重復、可靠的實驗數據,從而加快科研進程。南京QPCR基因擴增儀PCR儀有哪些
微量檢測:PCR 儀具有強大的信號放大能力,能夠將樣本中極其微量的轉基因 DNA 模板進行大量擴增。即使樣本中*含有少量的轉基因成分,經過多輪的 PCR 循環,也能使目標基因片段的數量呈指數級增長,達到可檢測的水平。通常可以檢測到樣本中低至 pg 級甚至 fg 級的轉基因 DNA,能夠滿足對各種復雜基質中微量轉基因成分的檢測需求。早期監測:這種高靈敏度使得 PCR 儀能夠在轉基因成分含量極低的早期階段就進行有效檢測,對于及時發現和監控轉基因生物的擴散、污染等情況具有重要意義,有助于采取相應的措施進行防控和管理。南京QPCR基因擴增儀PCR儀有哪些