上海嵩皓科學儀器有限公司2025-07-03
一、操作前準備
設備檢查與調(diào)試
開機預熱:啟動激光破膜儀及配套顯微鏡,確保設備運行穩(wěn)定,激光系統(tǒng)校準無誤(如光斑聚焦、能量參數(shù)初始化)。
參數(shù)設置:根據(jù)操作目的(如輔助孵化、活檢打孔)和胚胎 / 卵母細胞狀態(tài)(如透明帶厚度、發(fā)育階段),預設激光參數(shù)(包括功率、脈沖次數(shù)、脈沖寬度等,通常功率范圍在 1-10mW,脈沖次數(shù) 1-5 次)。
無菌環(huán)境準備:操作臺消毒,更換無菌耗材(如培養(yǎng)皿、顯微操作針、吸管),確保操作區(qū)域符合 IVF 實驗室無菌標準。
樣本準備
將待處理的胚胎或卵母細胞轉(zhuǎn)移至含培養(yǎng)液的無菌培養(yǎng)皿中,置于顯微鏡載物臺,調(diào)整焦距使透明帶清晰成像。
標記目標區(qū)域:通過顯微鏡目鏡或顯示屏定位需破膜的位置(如輔助孵化時選擇透明帶較薄處,活檢時避開內(nèi)細胞團)。
二、主要操作步驟
定位與瞄準
通過設備的定位系統(tǒng)(如 Red-I 目標定位器、十字光標)將激光光斑精確對準目標區(qū)域,確保光斑聚焦于透明帶表面(避免聚焦過深損傷內(nèi)部細胞)。
若設備支持動態(tài)追蹤(如 DTS 系統(tǒng)),可通過計算機控制激光頭移動,實現(xiàn)自動化定位,減少手動操作誤差。
激光發(fā)射與破膜
確認參數(shù)無誤后,啟動激光發(fā)射(單脈沖或多脈沖模式),通過激光的光熱效應或光機械效應在透明帶上形成小孔(孔徑通常為 5-30μm,根據(jù)需求調(diào)整)。
實時觀察破膜效果:通過顯微鏡確認透明帶是否成功打孔,孔的大小和位置是否符合預期,避免過度照射導致胚胎熱損傷。
操作后處理
破膜完成后,立即將胚胎 / 卵母細胞轉(zhuǎn)移至新鮮培養(yǎng)液中,避免長時間暴露在操作環(huán)境中。
記錄操作參數(shù)和結果(如打孔位置、脈沖次數(shù)、胚胎狀態(tài)),納入實驗室操作日志。
三、操作后設備維護
關閉激光系統(tǒng)和顯微鏡,清潔載物臺及接觸區(qū)域,避免培養(yǎng)液殘留污染。
定期對激光系統(tǒng)進行校準(如光斑一致性、能量穩(wěn)定性),確保設備性能符合臨床或?qū)嶒炓蟆?
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