總體而言,所有微生物生長繁殖均需要培養基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源,但由于微生物營養類型復雜,不同微生物對營養物質的需求是不一樣的,因此首先要根據不同微生物的營養需求配制針對性強的培養基。自養型微生物能從簡單的無機物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質、核酸、維生素等復雜的有機物,因此培養自養型微生物的培養基完全可以(或應該)由簡單的無機物組成。例如,培養化能自養型的氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxdans)的培養基組成見表3.9。在該培養基配制過程中并未專門加入其他碳源物質,而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。PTYG培養基 改良巴爾斯氏培養基基礎不含硫酸亞鐵銨 BM液體培養基 BM固體培養基 PS培養基/消化球菌肉湯培養基。AK瓊脂2號
細胞培養過程中,細胞培養基是不可或缺的,細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。通常細胞體外培養時需要加入血清,以維持細胞的生長和存活。而除了血清之外,部分細胞在培養過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分來維持細胞狀態。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細胞加入量會有差異,需根據細胞類型判斷。支原體培養基基礎肉汁培養基 棉子糖-組氨酸培養基 S培養基 改良高氏二號液體培養基 MS培養基(鏈霉菌)。
半組合培養基:指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。固體培養基:1.液體培養基:80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養成分的培養基。2.固體培養基:一類配制成的固體狀態的基質。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。3.半固體培養基:指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態的培養基。4.脫水培養基:又稱預制干燥培養基,指含有除水分外的一切成分的商品培養基。
培養細胞時應使用5%還是10%CO2,或者根本沒有影響?一般培養基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為pH的緩沖系統,而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中 NaHCO3含量為每公升3.7g時,細胞培養時應使用10% CO2;當培養基中NaHCO3 為每公升1.5g時,則應使用5%CO2培養細胞。NaHCO3的作用:培養基中使用了 NaHCO3-CO2 緩沖系統,并采用開放培養,使細胞代謝產生的CO2及時溢出培養瓶,再通過穩定調節溫箱中CO2濃度(5%) ,與培養基中的NaHCO3處于平衡狀態,從而調節培養基的PH值。NEAA:非必須氨基酸,NEAA(非必需氨基酸) 是含幾種非必需氨基酸的合劑,添加到的原培養基不同,NEAA 也有不同的種類,比如添加至MEM的NEAA,含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。橄欖油培養基基礎 察氏酵母膏瓊脂(CYA) 25%甘油硝酸鹽瓊脂基礎(G25N) 馬鈴薯瓊脂/無糖馬鈴薯瓊脂培養基.
什么培養基中可以省去加酚紅?酚紅在培養基中用作pH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質量并不會產生影響,可以通過純化技術去除,但酚紅在無血清培養基可能帶來胞內鈉/鉀失衡,影響細胞生長,當然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養基中必需的一種成分,很多國外的疫苗或抗體生產企業在生產過程中都使用無酚紅培養基。研究表明,酚紅可以模擬固醇類的作用。為避免固醇類反應,培養細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養基。Bennett瓊脂放線菌肉湯 葡萄糖天冬酰胺液體培養基葡萄糖天門冬素液體培養基脯氨酸培養基高氏二號培養基。VRE瓊脂基礎
蛋白胨-氯化鈉-纖維二糖-多黏菌素E(PNCC)增菌液 脫脂奶蔗糖蛋白胨培養基 改良的酵母浸汁-孟加拉紅肉湯。AK瓊脂2號
bFGF是一個肝素結合的多膚類絲裂源,普遍分布于各種組織中。bFGF 是一種重要的細胞增殖分化調節劑,可刺激多種細胞的增殖。有研究發現它對滋養細胞也有促增殖作用。bFGF 主要是與細胞膜上FGF受體結合發揮作用,刺激與增殖有關的基因表達。Thomson 等認為,像其他體外培養的人體細胞一樣,hES 細胞要求 bFGF 的存在以促進增殖。同理EGF(上皮生長因子) , 是人體內的一種活性物質,由53個氨基組成的活細胞,藉由刺激表皮細胞生長因子受體之酪氨酸磷酸化,達到修補增生肌膚表層細胞,據說對受傷、受損之表皮肌膚擁有很好的療效,其較大特點是能夠促進細胞的增殖分化。所以加入它們都是促進細胞增殖的。AK瓊脂2號
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