DNA Marker IV:精細的DNA分子量標準DNA Marker IV 是一種即用型的DNA分子量標準,廣應用于瓊脂糖凝膠電泳中,用于估算DNA片段的大小和進行粗略定量。它由多條線狀雙鏈DNA片段組成,能夠為DNA分析提供精確的分子量參考。產(chǎn)品特點組成:DNA Marker IV 由6-7條線狀雙鏈DNA片段組成,具體片段大小包括200 bp、500 bp、1000 bp、1500 bp、2000 bp、3000 bp、4500 bp和7000 bp。即用型設(shè)計:已預混1×Loading Buffer,使用時無需額外添加,直接上樣。清晰的條帶:電泳圖像清晰,背景干凈,條帶亮度均勻。穩(wěn)定性高:在室溫下可穩(wěn)定保存六個月,長期保存建議置于-20℃。使用方法上樣量:建議每次取2-5 μL直接加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中。如果加樣孔較寬,可適當增加上樣量。電泳條件:推薦使用1.0%-1.5%的瓊脂糖凝膠,1×TAE或0.5-1×TBE緩沖液,電壓4-10 V/cm,電泳時間20-40分鐘。染色與觀察:電泳結(jié)束后,使用溴化乙錠(EB)或其他DNA染料染色,紫外燈下觀察。注意事項保存條件:建議低溫保存,避免反復凍融。瓊脂糖質(zhì)量:電泳時應盡量選用質(zhì)量好的瓊脂糖,以獲得比較好分離效果。染料選擇:如果使用Goldview等染料,由于靈敏度較低,建議適當增加Marker的上樣量。Taq DNA Polymerase是一種源自嗜熱菌Thermus aquaticus的耐熱性DNA聚合酶的耐熱性和高效的DNA擴增能力。重組蛋白表達服務技術(shù)服務
除了CRISPR-Cas9技術(shù),還有其他幾種基因編輯技術(shù)可以用于金黃色葡萄球菌的研究:1.單堿基編輯技術(shù):這是一種新型的基因編輯技術(shù),可以在不切割DNA雙鏈的情況下實現(xiàn)基因的定點突變。季泉江教授課題組與中國科學院北京基因組所韓大力研究員課題組合作,在金黃色葡萄球菌中建立了單堿基編輯技術(shù),通過融合失活的Cas9蛋白(Cas9D10A)和胞嘧啶脫氨酶(APOBEC1),實現(xiàn)了高效單堿基編輯,有助于研究耐藥機制和開發(fā)新型手段。2.同源重組(HR)修復技術(shù):在某些細菌中,可以通過同源重組機制對CRISPR-Cas9系統(tǒng)產(chǎn)生的雙鏈DNA斷裂進行修復,實現(xiàn)基因的精確編輯。例如,在谷氨酸棒桿菌中,利用CRISPR/Cas9技術(shù)結(jié)合同源重組修復模板,實現(xiàn)了高效的基因缺失和點突變。3.非同源末端連接(NHEJ)相關(guān)蛋白共表達:通過共表達Cas9蛋白和NHEJ相關(guān)蛋白,如連接酶LigD,可以在鏈霉菌中實現(xiàn)有效的基因組編輯,這種方法不依賴于同源重組,可以應用于那些同源重組效率較低的細菌。4.CRISPR干擾技術(shù)(CRISPRi):利用失活的Cas9蛋白(dCas9)阻斷基因的轉(zhuǎn)錄,從而抑制特定基因的表達。這種技術(shù)可以用于研究基因功能和調(diào)控基因表達,已經(jīng)在多種細菌中得到應用。純化工藝服務技術(shù)服務技術(shù)服務其中,部分條帶(如1,000 bp或5,000 bp)會加亮顯示,便于快速定位和半定量分析。
漢遜酵母在HPVVLPs表達中,優(yōu)化糖基化修飾以提高蛋白質(zhì)的活性和穩(wěn)定性主要可以從以下幾個方面進行:1.選擇合適的表達載體和信號肽序列:使用分泌型表達載體可以促進外源蛋白在漢遜酵母中的分泌表達,同時選擇合適的信號肽序列可以引導蛋白質(zhì)正確定位和分泌,有助于完成糖基化等翻譯后加工過程。2.優(yōu)化培養(yǎng)條件:通過調(diào)整培養(yǎng)基的碳氮比、溫度、pH值等,可以影響漢遜酵母的生長和外源基因的表達,進而可能影響糖基化修飾的效果。例如,某些維生素和氨基酸的添加可以提高細胞生長和蛋白表達的效率。3.使用酶學方法進行糖基化修飾的調(diào)控:通過使用化學或酶學方法對特定糖基化位點進行切割或修飾,可以改善蛋白質(zhì)的糖基化模式,從而提高其穩(wěn)定性和活性。4.利用基因編輯技術(shù):通過CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù),對漢遜酵母中參與糖基化的基因進行敲除或敲入,可以改變酵母的糖基化能力,從而優(yōu)化HPVVLPs的糖基化修飾。5.采用雜合共組裝技術(shù):通過分子生物學技術(shù)實現(xiàn)不同型別HPV衣殼蛋白的雜合共組裝,可以形成具有新的糖基化模式和改善的穩(wěn)定性的VLPs。
GTBE電泳緩沖液(1×):高效分離DNA片段的科研利器GTBE電泳緩沖液(1×)是一種專為DNA電泳設(shè)計的緩沖液,廣應用于分子生物學實驗中,尤其適用于分離相對較小的DNA片段(小于2000bp)。其主要成分包括甘氨酸、TBE(Tris-硼酸-EDTA)緩沖液。產(chǎn)品特點與優(yōu)勢高效分離能力:GTBE緩沖液的緩沖能力較弱,但特別適合分離小于2000bp的DNA片段,能夠提供清晰的電泳條帶。兼容性高:該緩沖液可用于常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳,也可用于脈沖場凝膠電泳,滿足多種實驗需求。穩(wěn)定性強:GTBE電泳緩沖液(1×)在室溫下保存,有效期可達12個月,使用方便。使用方法制備凝膠:使用1×GTBE緩沖液制備瓊脂糖凝膠。加樣與電泳:將樣品加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中,進行電泳。染色與觀察:電泳結(jié)束后,使用合適的核酸染料(如EB或GoldView)對凝膠進行染色,并在紫外透射儀下觀察結(jié)果。注意事項安全操作:為確保實驗安全,操作時需佩戴實驗服和一次性手套。保存條件:產(chǎn)品應保存于室溫,避免長時間暴露在高溫或強光下。使用期限:GTBE電泳緩沖液(1×)的有效期為12個月,建議在開封后盡快使用。DNA Marker I是一種即用型產(chǎn)品,已預混1×Loading Buffer,可直接取5-10 μL用于電泳,無需額外處理。
大腸桿菌表達系統(tǒng)在實際應用中具有一系列優(yōu)勢和局限性:優(yōu)勢:1.高表達水平:大腸桿菌能夠?qū)崿F(xiàn)高水平的目標蛋白表達,通常能夠達到目標蛋白總細胞蛋白的10-50%左右。2.簡單易用:培養(yǎng)和操作相對簡單,不需要復雜的培養(yǎng)條件和設(shè)備。3.高純度蛋白:目標蛋白通常以包涵體形式存在,通過簡單的離心和洗滌步驟,可以得到高純度的蛋白。4.經(jīng)濟實惠:培養(yǎng)成本相對較低,成本效益高。5.高生物活性:表達的蛋白通常具有較高的生物活性,適合功能研究和生物活性測試。局限性:1.蛋白質(zhì)折疊問題:作為原核細胞,大腸桿菌可能無法正確折疊某些復雜蛋白質(zhì),導致表達產(chǎn)物不具功能性。2.內(nèi)毒的素產(chǎn)生:表達系統(tǒng)中細胞壁內(nèi)毒的素的產(chǎn)生可能導致細胞毒性,并對目標蛋白的純化和功能造成困擾。3.限制于溶解態(tài)蛋白質(zhì):主要適用于溶解態(tài)蛋白質(zhì)表達,對于聚集態(tài)或難溶性蛋白質(zhì)的表達可能存在困難。DL100 DNA Marker憑借其準確的分子量范圍、清晰的條帶和便捷的操作,成為了分子生物學實驗中的得力助手。河北畢赤酵母表達病毒樣顆粒技術(shù)服務開發(fā)
Ultra-Long Master Mix 能夠兼容多種類型的模板,包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、cDNA以及粗提的動植物組織核酸等。重組蛋白表達服務技術(shù)服務
50×TBE粉劑是一種高濃度的緩沖液原料,主要成分包括Tris(三羥甲基氨基甲烷)、硼酸和EDTA(乙二胺四乙酸)。它是一種廣用于瓊脂糖凝膠電泳的緩沖液,能夠為DNA片段的分離和分析提供穩(wěn)定的環(huán)境。與液體形式相比,粉劑具有更高的穩(wěn)定性和更長的保質(zhì)期,適合長期儲存。50×TBE粉劑的優(yōu)勢高效分離:TBE緩沖液具有較高的離子強度,適合分離小分子量的DNA片段。它能夠在電泳過程中提供穩(wěn)定的電流,確保DNA片段的清晰分離,尤其在高分辨率電泳中表現(xiàn)出色。經(jīng)濟實用:粉劑形式的TBE在運輸和儲存過程中更加方便,且成本較低。用戶可以根據(jù)實驗需求自行配制不同體積的工作液,減少了浪費,降低了實驗成本。穩(wěn)定性高:50×TBE粉劑在干燥條件下非常穩(wěn)定,不易受環(huán)境因素影響。即使在實驗室條件下長期保存,也能保持良好的性能。兼容性強:50×TBE粉劑適用于多種類型的瓊脂糖凝膠電泳,無論是低濃度還是高濃度的凝膠,都能提供良好的分離效果。此外,它還兼容多種核酸染料,如EB、GoldView等。使用方法使用50×TBE粉劑時,需按照以下步驟配制緩沖液:根據(jù)實驗需求,稱取適量的50×TBE粉劑。將粉劑溶解于適量的去離子水中,攪拌至完全溶解。定容至所需體積,得到50×TBE濃縮液。重組蛋白表達服務技術(shù)服務
RNA上樣緩沖液簡介RNA上樣緩沖液是分子生物學實驗中用于RNA電泳分析的一種輔助試劑。它通過提供適當?shù)慕橘|(zhì)和條件,幫助RNA樣品在凝膠中有效遷移和分離。功能樣品沉降:增加樣品的密度,使其更容易沉入凝膠孔中。電泳指示:含有染料,如溴酚藍或二甲苯青,幫助觀察樣品遷移。樣品保護:在電泳過程中保護RNA分子,減少降解。使用方法樣品準備:將RNA樣品與上樣緩沖液混合,通常按1:1的比例。變性處理:對于需要變性的電泳,樣品可與甲醛混合并加熱變性。上樣:將混合后的樣品加入凝膠孔中。電泳:在電場作用下進行電泳,觀察RNA的片段的遷移。保存建議短期:4℃保存,可保持一個月。長期:-20℃保存,可延長有效期至兩...