數字PCR（DigtalPCR）是一種核酸定量精密檢測的新興技術手段，于20世紀由Vogelstein等提出。它是將稀釋后的核酸模板分配到大量不同的反應單元中，使每個反應單元中有一個或沒有核酸。利用PCR擴增的同時，加入可檢測熒光。待擴增結束時，使用統計學方法采集每個反應單元出現的熒光次數，從而定量檢測樣本中的核酸濃度。基于分液方式的不同，數字PCR主要分為3種：微流體數字PCR(MicrofluidicdigitalPCR，mdPCR)、微滴數字PCR(DropletdigitalPCR，ddPCR)和芯片數字PCR(ChipdigitalPCR，cdPCR)。數字PCR ，就選浚和(上海)儀器科技有限公司。青海實驗室數字PCR維修

要了解為什么傳統PCR存在限制，務必要了解PCR反應過程中發生了什么。基本PCR運行可以分為三個階段：指數期每個循環積聚的產物準確加倍（假定**反應效率）。該反應具有高度特異性和精確度。出現指數式擴增，因為所有試劑均新鮮可用，反應的動力學推動反應有利于擴增子加倍。線性期（高變異性）隨著反應繼續，一些試劑因擴增而被消耗。反應開始減緩，并且每個循環的PCR產物不再加倍。平臺期（終點：使用傳統方法進行凝膠檢測）反應停止，不再產生更多產物，并且如果放置時間夠長，PCR產物將開始降解。因為每個樣品具有不同的反應動力學，所以每支試管或每個反應將在不同的時間點進入平臺期。在平臺期可以看到這些差異。在平臺期內，傳統PCR進行測量，又稱為終點檢測。貴州噪音小數字PCR商家數字PCR ，就選浚和(上海)儀器科技有限公司，用戶的信賴之選，有想法可以來我司咨詢！

與常規的PCR的方法相比，dPCR有很好的優勢。***定量常規PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數的標準DNA制定標準曲線，由于樣品測定在各種條件上不會完全一致，會造成PCR擴增效率的差異，從而影響定量結果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學影響，可以進行***定量。樣品需求量低在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優勢。高靈敏度ddPCR本質上是 將一個傳統的PCR反應分成了數萬個 的PCR反應，在這些反應中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品，且能避免非同源異質雙鏈的形成。高耐受性由于目的序列被分配到多個微滴中，***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對反應的干擾，擴增基質效應大大減小。

與常規PCR方法相比，數字PCR有如下優勢：1、能夠完全定量：常規PCR定量需要制定已知拷貝數的標準DNA曲線，但是由于待檢樣本與標準曲線不在統一體系，條件上會存在差異，另外加上PCR擴增效率的差異從而影響定量結果的準確性。而數字PCR不受標準曲線和擴增動力學影響，可進行完全定量。2、樣本需求量低：適用于珍貴樣本或核酸降解嚴重的樣本3、靈敏度高：數字PCR是將傳統PCR反應體系分割成數萬個 PCR反應，這些反應可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質雙鏈的形成。4、高耐受性：由于目的序列被分配到多個 反應體系中，明顯降低了背景信號和yìzhì物對反應的干擾，擴增基質效應大大減小。數字PCR ，就選浚和(上海)儀器科技有限公司，用戶的信賴之選，有想法的不要錯過哦！

在定量PCR時，我們常常糾結一個問題，究竟是相對定量還是***定量呢？如今，你無需糾結了，因為數字PCR（digitalPCR）來了。盡管這兩種技術有些類似，都是估計起始樣品中的核酸量，但它們有一個重要的區別。定量PCR是依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，而數字PCR則讓你能夠直接數出DNA分子的個數，是對起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應用領域：拷貝數變異、突變檢測、基因相對表達研究（如等位基因不平衡表達）、二代測序結果驗證、miRNA表達分析、單細胞基因表達分析等。浚和(上海)儀器科技有限公司是一家專業提供數字PCR 的公司，歡迎您的來電哦！西藏分析數字PCR代理商

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同時，從公式也可以看出，隨著反應陽性體系數（X）的增加，體系中目標分子的拷貝數相對于X會有較大的差距，隨著X的持續增加，數字PCR結果的不確定度也隨著提高，總體來說，數字PCR陽性體系的數量不得超過總體系數量的80%。另一個方面，N的增加會使整個數字PCR體系具有較大的線性范圍，并可以提高反應的靈敏度、穩定性以及可重復性。因此，目前dPCR都需要在成本可控的情況下，增加分配的腔室數和液滴數。商業化dPCR平臺及其特點發展到現在，市面上常見的dPCR主要有兩種：微滴式dPCR（dropletdPCR，ddPCR）和芯片式dPCR（chipdPCR，cdPCR）技術。由于芯片式dPCR制造芯片的成本較高，目前微滴式dPCR正越來越受到企業的認可。青海實驗室數字PCR維修