芯棄疾JX-8B數字ELISA產品是什么?怎么做到單分子技術的低成本實現?參考原理:
分子水平的疾病檢測正在推動早期診斷和治病的新興變革。該領域面臨的一個挑戰是,用于早期診斷的蛋白質生物標志物可能存在于非常低的豐度中。傳統免疫分析技術的檢測下限為飛摩爾范圍(10?13M)。數字免疫分析技術將檢測靈敏度提高了三個數量級,達到了飛摩爾范圍(10?16M)。這一能力有可能在診斷和治病領域開辟新的進展,但這些技術已被限制為不適合高效常規使用的手動程序。我們描述了一種新的實驗室儀器,該儀器能夠完全自動化單分子陣列(Simoa)技術進行數字免疫分析。該儀器具有單分子靈敏度和多重檢測,具有快速周轉時間和每小時處理66個樣本的能力。針對心血管、腫標、傳染病、神經學和炎癥研究中的16種感興趣的蛋白質,開發了單分子和多重數字免疫分析方法。與傳統方法相比,Simoa免疫分析方法的平均靈敏度提高了lELISAwas>1200倍,變異系數為<10%。數字免疫分析在推進人類診斷方面具有潛力,這在兩個臨床領域得到了體現:創傷性腦損傷和傳染病的早期檢測 芯棄疾JX-8B數字ELISA,極速檢測,快15min就能完成的單分子免疫檢測!芯棄疾單分子數字ELISA極速檢測
芯棄疾JX-8B數字ELISA產品
每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測
人類形式的蛋白質被加入到25%牛血清中以代替臨床測試樣本;通常使用四倍稀釋因子以減少免疫測定中的基質效應4。使用數字ELISA檢測25%血清中的PSA,從該實驗中確定了LOD為~50aM(1.5fg/mL),相當于整個血清中的LOD為~200aM(6fg/mL)。檢測到的比較低濃度為250aM,相當于25%血清中的1fMin全血清。由于LOD是通過外推背景濃度來確定的加上背景的三個標準差,不同運行的LOD取決于背景的CV。在具有典型背景方差的幾個實驗中,全血清PSA的亞飛摩爾LOD得以保持。相比之下,一種前列的商業PSA檢測方法(ADVIACentaur,西門子)報告在人血清中的LOD為3pM(0.1ng/mL),并且已經報道了LOD在10-30fM17,26。 醫學實驗室數字ELISA芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測產品,每個實驗室都能用的單分子檢測;
芯棄疾JX-8B數字ELISA高敏檢測產品;具有以下特點:多重、超敏微量、極速靈活、開放;
只有少量分泌蛋白可測量的可能性突顯了蛋白質測量領域面臨的挑戰:醫學上相關的生物標志物可能存在于非常低的豐度中。免疫測定仍然是是蛋白質生物標志物敏感和特異性測量的基礎。然而,傳統的免疫分析技術在檢測不可測量的生物標志物時靈敏度不足,這些生物標志物肯定位于當前可檢測范圍之下。主流的傳統免疫分析方法——包括酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、化學發光和電化學發光——的靈敏度下限約為10^-13M(~<0.1pM)。許多降低靈敏度的方法已被描述,包括拉曼增強信號檢測、電感耦合等離子體質譜,但這些方法的數據表明其成功有限。非常規方法如亞飛摩爾級檢測具有明顯的權衡,例如程序較長或無法提供定量答案。
芯棄疾JX-8B數字ELISA產品每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測SiMoA通過將單個酶產生的熒光團限制在極小范圍內,從而能夠檢測到非常低濃度的酶標記物體積(~50fL),導致熒光產物分子的局部高濃度。為了在免疫測定中實現這種定位,在第二步中,將珠子加載到一個陣列為離散的微升大小的孔(圖1C)。本研究中使用的2毫米寬陣列有~50,000個孔,孔徑為μm,孔深為μm。加載后的陣列在含有熒光酶底物液滴的情況下,用橡膠密封圈密封。Rissin等人,第3頁將每個微球隔離在飛升反應室中。具有單一酶的微球標記的免疫復合物在50飛升的反應室中產生局部高濃度的熒光產物(圖1D)。通過使用標準顯微鏡光學系統獲取陣列的時間變化熒光圖像,可以區分與單一酶分子相關的微球(“開啟”孔)和不與酶相關的微球(“關閉”孔);補充圖1顯示了“開啟”和“關閉”孔的熒光直方圖。成像陣列可以成千上萬的單個免疫復合物同時檢測。通過測定供試品中的蛋白質濃度來確定計算含有珠子和熒光產物的孔數相對于含有珠子的孔數(圖1D)。使用SiMoA,濃度是因此,我們稱SiMoA應用于檢測單個免疫復合物為數字ELISA。 芯棄疾JX-8B數字ELISA,微量多重檢測,微量樣本就能同時測試4項指標;
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光纖束購自SchottNorthAmericaouthbri,非增強型光澤硅片購自SpecialtyManufacturing(Saginaw,NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人,第7頁鹽酸、無水乙醇和分子生物學級別的吐溫-20均購自西格瑪-奧德里奇(圣路易斯,密蘇里州)。2.7-μm-二羧基磁珠購自瓦里安公司(加利福尼亞州萊克福斯特)。單克隆抗人TNF-α捕獲抗體、多克隆抗人TNF-α檢測試劑和重組人TNF-α均購自R&DSystems(Minneapolis,MN)。單克隆抗PSA捕獲抗體、單克隆抗PSA檢測試劑和純化的PSA購自BiosPacific(埃默里維爾,加利福尼亞州);使用標準方法將檢測試劑抗體生物素化。1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS)和SuperBlock®T-20封閉緩沖液購自ThermoScientific(Rockford,IL)。純化DNA購自綜合DNA技術公司(Coralville,IA)。 芯棄疾JX-8B簡易版單分子ELISA檢測產品, 極速檢測,快至15min能完成 的ELISA檢測!飛克級數字ELISA芯片
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創新性的解決方案:芯棄疾JX-8B數字ELISA應用范圍:各種高靈敏多重免疫檢測,可替代各種ELISA試劑盒,及其他免疫檢測產品。蛋白質生物標志物在區分健康和疾病狀態方面的臨床應用,而監測疾病進展則需要測量復雜樣品中的低濃度蛋白質。目前的免疫測定方法測量的是蛋白質的濃度高于10?12M,6而大多數在病癥7、神經疾病8,9和接觸早期階段10中重要的蛋白質的濃度被認為在10?16到10?12M之間。需要提高靈敏度的例子包括:一個由一百萬個細胞組成的1毫米3疾病,每個細胞分泌5000種蛋白質到5升液體中。Simoa®由現任于哈佛大學醫學院的DavidWalt教授作為科學創始人于2007年創立。DavidWalt是美國的工程院,藝術院和醫學院三院院士。2010年,DavidWalt將Simoa®技術以封面文章的形式發表在《NatureBiotechnology》上,此技術開始為大眾所知并引起業界轟動。Simoa技術(Single-moleculeArray,Quanterix公司)特點是通用陣列化檢測,實現超高的靈敏度,較傳統ELISA方法能夠高出3個數量級,達到飛克級別(fg/ml)甚至更低。已拿阿茲海默癥的兩個FDAbreakthroughdevice;通常用于各種科研方向:神經因子、蛋白組學、細胞因子等。 芯棄疾單分子數字ELISA極速檢測