pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的產(chǎn)品組分通常包括以下幾個(gè)部分:1.**pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶蛋白**:一種高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶突變體與ProteinA的融合蛋白,它是產(chǎn)品的主要組分,用于實(shí)現(xiàn)DNA片段化和接頭連接的功能。2.**儲(chǔ)存溶液**:碧云天的BeyoNGS?pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶產(chǎn)品含有特定的儲(chǔ)存溶液,其組成為50mMHEPES(pH7.2),100mMNaCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.1%TritonX-100,50%(v/v)Glycerol,這種溶液有助于保持酶的穩(wěn)定性和活性。3.**測序接頭(Adapters)**:用于與pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶組裝形成pA-Tn5轉(zhuǎn)座體(pA-Tn5Transposome),這是進(jìn)行CUT&Tag實(shí)驗(yàn)的必需組分。4.**反應(yīng)緩沖液**:部分產(chǎn)品包含用于轉(zhuǎn)座酶反應(yīng)的緩沖液,例如5×TagmentBuffer,這種緩沖液含有Mg2+,對轉(zhuǎn)座酶的活性至關(guān)重要。5.**附件**:某些產(chǎn)品可能還包括附件,如說明書,提供產(chǎn)品使用和保存的詳細(xì)信息。6.**其他組分**:根據(jù)產(chǎn)品的不同,可能還包括CouplingBuffer、AnnealingBuffer等其他輔助組分,這些組分有助于轉(zhuǎn)座酶與DNA的結(jié)合和反應(yīng)的進(jìn)行。7.**包裝規(guī)格**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶的包裝規(guī)格可能有所不同,例如碧云天提供的BeyoNGS?pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶有800pmol和4000pmol兩種包裝規(guī)格。CB1受體包含多個(gè)跨膜α-螺旋結(jié)構(gòu)域,這些結(jié)構(gòu)域使得受體能夠嵌入細(xì)胞膜中。 它具有七個(gè)跨膜區(qū)域。Recombinant Human PRL-3/PTP4A3 Protein,His Tag
PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行電泳分析通常涉及以下步驟:PCR擴(kuò)增:首先使用PCR Master Mix和特定的引物對目標(biāo)DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物的準(zhǔn)備:如果使用的是含有預(yù)混凝膠加載染料的PCR Master Mix(如某些Blood Direct PCR Master Mix),則PCR產(chǎn)物在擴(kuò)增后已經(jīng)含有了適合電泳的染料。如果沒有使用含染料的Master Mix,則需要在PCR反應(yīng)完成后向產(chǎn)物中添加適量的凝膠加載染料。電泳槽的準(zhǔn)備:清潔電泳槽,確保沒有灰塵或殘留物。安裝電泳板和梳子,注意密封以防緩沖液泄漏。灌注緩沖液:向電泳槽中灌注適量的電泳緩沖液,常用的緩沖液有1X TAE或1X TBE。PCR產(chǎn)物的加載:將PCR產(chǎn)物輕輕混合均勻,避免氣泡的產(chǎn)生。使用移液槍或微量移液管將PCR產(chǎn)物加入到凝膠孔中。如果PCR Master Mix中已含有染料,通常不需要額外添加。電泳條件的設(shè)置:根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小和凝膠的濃度選擇合適的電壓和時(shí)間進(jìn)行電泳。例如,較小的DNA片段可能需要較高的電壓,而較大的片段則可能需要較低的電壓和更長的時(shí)間。Recombinant Mouse IGF-1重組人泛素是一種蛋白質(zhì),它是一種含有76個(gè)氨基酸的高度保守的蛋白質(zhì),存在于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。
染料預(yù)混合的PCRMasterMix是一種特殊的PCR反應(yīng)液,它在配方中已經(jīng)預(yù)先加入了適合電泳分析的染料。這種設(shè)計(jì)使得PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物可以直接用于凝膠電泳,無需額外添加上樣緩沖液,從而簡化了操作流程并減少了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。以下是一些關(guān)于染料預(yù)混合PCRMasterMix的特點(diǎn):1.**方便性**:由于省去了擴(kuò)增后添加上樣緩沖液的步驟,使得PCR到電泳的過渡更為簡便快捷。2.**一致性**:預(yù)混合的染料確保了每次PCR實(shí)驗(yàn)中使用的染料濃度一致,有助于提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。3.**可視化**:一些染料預(yù)混合PCRMasterMix使用的染料在紫外光下具有明顯的熒光或顏色變化,有助于在電泳過程中實(shí)時(shí)監(jiān)控DNA條帶的形成。4.**兼容性**:預(yù)混合的染料通常與各種類型的PCR儀器和電泳設(shè)備兼容。5.**穩(wěn)定性**:預(yù)混合的染料在MasterMix中保持穩(wěn)定,直到使用時(shí)才與DNA樣本接觸,減少了染料降解或失效的風(fēng)險(xiǎn)。6.**靈敏度**:某些染料具有較高的靈敏度,可以檢測到極少量的DNA,有助于提高PCR檢測的靈敏度。7.**安全性**:預(yù)混合的染料減少了操作過程中的接觸次數(shù),降低了樣品交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)是一種用于合成互補(bǔ)DNA(cDNA)的試劑盒,它通過逆轉(zhuǎn)錄過程從信使RNA(mRNA)或總RNA模板合成cDNA的鏈。這類試劑盒通常包含逆轉(zhuǎn)錄酶(ReverseTranscriptase,RT)和其他必要的組分,以確保高效和準(zhǔn)確的cDNA合成。RNaseH-表示該試劑盒使用的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏RNaseH活性,這意味著在合成cDNA鏈的過程中不會(huì)發(fā)生RNA的降解,從而可以產(chǎn)生更高產(chǎn)量的全長cDNA,特別是從較長的模板(可達(dá)13kb)。該試劑盒通常包括以下組分:-逆轉(zhuǎn)錄酶,如RevertAidHMinusM-MuLVReverseTranscriptase,它通過點(diǎn)突變完全消除了RNaseH活性。-RiboLockRNaseInhibitor,這是一種重組蛋白,可有效保護(hù)RNA在高達(dá)55°C的溫度下不受RNases的降解。-緩沖液、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)和其他輔助成分,以支持cDNA合成反應(yīng)。-有時(shí)還包括用于去除RNA樣品中污染的基因組DNA的DNaseI。合成的cDNA可以作為PCR或?qū)崟r(shí)PCR的模板直接使用,也適用于第二鏈cDNA合成或線性RNA放大。此外,可以在cDNA合成過程中加入放射性或非放射性標(biāo)記的核苷酸,以便在包括微陣列在內(nèi)的雜交實(shí)驗(yàn)中作為探針使用。在蛋白質(zhì)的晶體學(xué)研究中,去除糖鏈可以幫助獲得去糖基化的蛋白質(zhì),這有助于更清晰地解析蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)。
pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶是一種經(jīng)過特殊改造的融合蛋白,由ProteinA和高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶組成,具有以下主要應(yīng)用:1.**高通量測序建庫**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶可以用于快速構(gòu)建用于高通量測序的DNA文庫,通過其轉(zhuǎn)座酶活性實(shí)現(xiàn)DNA片段化,同時(shí)加上測序接頭,簡化了傳統(tǒng)DNA測序建庫的多步過程。2.**CUT&Tag技術(shù)**:這是一種新興的蛋白質(zhì)與DNA相互作用研究方法,pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶利用ProteinA與特定抗體結(jié)合,將轉(zhuǎn)座酶帶到目標(biāo)蛋白附近進(jìn)行DNA切割和標(biāo)簽添加,實(shí)現(xiàn)對蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)的高通量測序分析。CUT&Tag技術(shù)具有高特異性、低背景噪音、高靈敏度、良好重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn),適用于表觀遺傳學(xué)、干細(xì)胞等領(lǐng)域的研究。3.**ATAC-seq**:pA-Tn5轉(zhuǎn)座酶也可用于ATAC-seq實(shí)驗(yàn),這是一種研究染色質(zhì)可及性的方法,通過轉(zhuǎn)座酶在沒有核酸酶消化的情況下切割染色質(zhì)DNA,然后在切割位點(diǎn)加上測序接頭,進(jìn)行后續(xù)的測序分析。4.**轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫**:有研究開發(fā)了基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的轉(zhuǎn)錄組測序快速建庫方法,例如SHERRY方法,它利用Tn5轉(zhuǎn)座酶直接作用于RNA/DNA雜交鏈,簡化了建庫過程,適用于單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序,提高了樣本的利用率和測序速度。
泛素化是一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾過程,涉及將泛素分子共價(jià)結(jié)合到靶蛋白上。這個(gè)過程由一系列酶促反應(yīng)組成。Recombinant Human PRL-3/PTP4A3 Protein,His Tag
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)通常提供幾種不同類型的引物用于啟動(dòng)cDNA的合成。這些引物包括:1.**Oligo(dT)引物**:這種引物通常與mRNA的poly(A)尾部互補(bǔ)配對,適用于從真核生物的mRNA中合成cDNA。它能夠產(chǎn)生大量全長cDNA,特別是當(dāng)模板來源于真核生物時(shí)。2.**隨機(jī)六聚體引物(RandomHexamers)**:這些引物是一組隨機(jī)的六核苷酸序列,可以與RNA模板的任何部分結(jié)合,從而啟動(dòng)cDNA的合成。它們適用于mRNA、rRNA、tRNA和長非編碼RNA等多種類型的RNA模板。3.**基因特異性引物(GeneSpecificPrimers)**:這些引物是針對特定基因序列設(shè)計(jì)的,可以用于從總RNA或mRNA中合成特定基因的cDNA。它們通常用于當(dāng)需要選擇性地?cái)U(kuò)增特定基因或基因家族時(shí)。在選擇引物時(shí),需要考慮RNA模板的來源、RNA的質(zhì)量和特性以及后續(xù)實(shí)驗(yàn)的需求。例如,如果RNA模板具有復(fù)雜的二級結(jié)構(gòu)或較高的GC含量,可能需要使用隨機(jī)引物以提高cDNA合成的效率。另外,如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)是qPCR,可以將Oligo(dT)與隨機(jī)引物混合使用,以提高qPCR結(jié)果的真實(shí)性和重復(fù)性。Recombinant Human PRL-3/PTP4A3 Protein,His Tag
Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus):高效防污染的探針法qPCR解決方案Probe qPCR Mix (2×, UDG Plus) 是一種為探針法實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)設(shè)計(jì)的即用型預(yù)混液,結(jié)合了熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、dUTP和UDG酶,能夠有效防止PCR產(chǎn)物污染,提高檢測的特異性和準(zhǔn)確性。產(chǎn)品特點(diǎn)高特異性和靈敏度:采用抗體修飾的熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶,結(jié)合優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,有效減少非特異性擴(kuò)增,提高檢測靈敏度。防污染設(shè)計(jì):預(yù)混液中包含UDG酶和dUTP,可在反應(yīng)前降解含尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,防止氣溶膠污染。多重檢測能力:支持多重qPCR反...