重組酶聚合酶擴增技術(RecombinasePolymeraseAmplification,簡稱RPA)是一種核酸擴增技術,能夠在等溫條件下快速檢測特定DNA序列。這項技術以其快速、靈敏度高、特異性強、對設備要求低等優點,在臨床快速診斷、食品檢測、防控、工業應用、現場實時檢測等領域具有廣泛的應用潛力。**技術原理**:RPA技術主要依賴于幾種關鍵的酶和蛋白質:-**重組酶**:能夠識別并結合到單鏈核酸(寡核苷酸引物)上。-**單鏈DNA結合蛋白(SSB)**:與被置換的單鏈DNA結合,防止其重新結合形成雙鏈。-**鏈置換DNA聚合酶**:在引物定位同源序列后,進行鏈延伸,實現DNA的指數增長。RPA的工作原理是,重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成,對模板上的目標區域進行指數式擴增。整個過程進行得非常快,一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。**技術優勢**:-**快速性**:RPA可以在37-42°C的等溫條件下快速完成核酸的擴增,通常在10到30分鐘內即可完成。-**靈敏度和特異性**:RPA能夠檢測低至單拷貝的核酸模板,并具有高特異性。
T4UvsX重組酶是一種來源于T4噬菌體的酶,屬于RecA/Rad51家族的同源體。這種重組酶在雙鏈DNA斷裂的修復以及復制叉重新啟動的過程中扮演著重要角色。T4UvsX重組酶能夠與其他DNA結合蛋白或輔助因子協同作用,與單鏈DNA形成核酸蛋白復合物。該復合物通過尋找與目標DNA互補的區域進行雜交,以完成鏈置換反應,且此酶本身不具有核酸酶活性。產品應用方面,T4UvsX重組酶主要用于等溫擴增技術,如重組酶聚合酶擴增(RPA)技術。它在實驗中與T4UvsY重組酶、BsuDNA聚合酶(大片段)、T4基因32蛋白(gp32)等組分一同使用,以優化RPA擴增反應。T4UvsX重組酶的保存條件為-20℃,可保存3年,或者-20℃儲存有效期為2年,避免反復凍融。其儲存液通常包含Tris-HCl、KCl、DTT、EDTA和甘油等成分,以保持酶的穩定性和活性。熱失活處理為60℃孵育10分鐘。在使用T4UvsX重組酶時,需要注意其保存液中甘油含量較高,建議單獨分裝保存,并且在操作時穿著實驗服并佩戴一次性手套,以確保安全。此外,該產品供科研使用,不應用于臨床診斷。Recombinant Human TRAIL R2/DR5/TNFRSF10B Protein,His-Avi TagGPRC5D蛋白在宿主細胞內通過自組裝形成VLP。這一步驟通常在細胞內發生,以提高VLP的產量和質量。
dNTPMix(脫氧核苷酸三磷酸混合溶液)的"特異性"一詞在不同的上下文中可能有不同的含義。在分子生物學領域,特異性通常指的是分子識別和相互作用的精確性。對于dNTPMix,特異性可以指以下幾個方面:1.**堿基特異性**:dNTPMix包含四種dNTPs(dATP、dCTP、dGTP、dTTP),每種對應DNA中的一個特定堿基。在DNA合成過程中,DNA聚合酶確保只有正確的互補dNTP與模板鏈上的堿基配對,這體現了堿基配對的特異性。2.**酶特異性**:某些DNA聚合酶具有校正(proofreading)功能,它們可以識別并修正配對錯誤,提高DNA合成的特異性。3.**應用特異性**:dNTPMix可以為特定的DNA合成應用提供所需的所有四種核苷酸,例如PCR、cDNA合成、DNA測序等。不同的應用可能需要特定的dNTP濃度或配方。4.**質量控制特異性**:dNTPMix在生產過程中會進行質量控制,以確保沒有雜質、DNase和RNase污染,保證產品在實驗中的特異性表現。5.**穩定性和純度特異性**:dNTPMix的穩定性和純度(通常≥99%)對于實驗的成功至關重要,高純度的dNTPMix可以減少非特異性反應的發生。6.**反應條件特異性**:使用dNTPMix時,需要考慮反應條件的特異性,如Mg2+濃度、pH值、溫度等,這些條件都會影響DNA合成的特異性。
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)主要用于從RNA模板合成鏈cDNA,而不是直接用于線性RNA的放大。然而,合成的cDNA可以作為模板用于后續的線性RNA放大過程,這通常涉及以下幾個步驟:1.**cDNA合成**:使用1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)按照試劑盒的說明進行操作,從線性RNA模板合成鏈cDNA。2.**第二鏈cDNA合成**:在某些情況下,可能需要合成雙鏈cDNA。這可以通過使用DNA聚合酶和第二鏈合成試劑來完成,從而獲得完整的雙鏈cDNA。3.**線性RNA放大**:一旦獲得了cDNA,可以使用體外轉錄(IVT,InVitroTranscription)技術來放大RNA。這通常涉及以下步驟:-使用含有RNA聚合酶啟動子序列的特定引物對cDNA進行PCR擴增。-使用含有RNA聚合酶識別位點的引物進行體外轉錄反應,以合成大量RNA拷貝。4.**RNA純化**:體外轉錄產生的RNA需要通過適當的方法(如柱層析或沉淀)進行純化,以去除DNA模板、未反應的核苷酸和其他雜質。5.**RNA質量檢測**:使用凝膠電泳或生物分析儀檢測RNA的質量和大小,確保RNA的完整性和純度。蛋白在表達過程中形成包涵體,需要通過復性步驟恢復其活性。這通常涉及物質的存在下進行蛋白質的重折疊。
T4UvsX重組酶是一種來源于T4噬菌體的酶,它是RecA/Rad51家族的同源體。這種重組酶在雙鏈DNA斷裂的修復和復制叉重新啟動的過程中起到重要作用。T4UvsX重組酶可以通過與其他DNA結合蛋白或輔助因子一起與單鏈DNA形成核酸蛋白復合物,并通過尋找與靶標DNA的互補區域進行雜交,以完成鏈置換反應。此外,T4UvsX重組酶在生產時由大腸桿菌表達和純化。T4UvsX重組酶的產生過程涉及到基因工程和蛋白質表達的常規技術。首先,T4噬菌體的基因序列被識別并克隆到適合的表達載體中,然后這個載體被轉化到大腸桿菌宿主細胞中。在宿主細胞內,T4UvsX基因被轉錄和翻譯,產生重組酶蛋白。隨后,通過一系列步驟包括細胞培養、蛋白質表達、細胞裂解、蛋白質純化等,獲得所需的T4UvsX重組酶。這一過程通常在生物技術實驗室中進行,并且需要精確的分子生物學操作和蛋白質工程知識。
Cas9 NLS可用于體外實驗中篩選能夠高效引導Cas9蛋白進行DNA剪切的gRNA序列 。Recombinant Human FGFR2 beta (IIIb) Protein,hFc Tag
Benzonase核酸酶殘留檢測試劑盒通過以下方式實現高靈敏性:1.**熒光探針技術**:試劑盒采用熒光標記的DNA探針,這種探針在沒有Benzonase核酸酶的樣品中穩定存在且不產生熒光信號。當樣品中含有核酸酶殘留時,核酸酶會切割熒光標記的DNA探針,導致熒光信號的增強。這種變化可以用來定量分析Benzonase的殘留量,實現高靈敏度檢測。2.**熒光共振能量轉移(FRET)**:該技術利用了供體(Donor)和受體(Acceptor)熒光基團間的相互作用。在未切割狀態下,供體的熒光被受體淬滅,而一旦DNA探針被Benzonase切割,供體熒光基團與受體分離,熒光信號增強,從而實現高靈敏度的檢測。3.**優化的底物探針**:試劑盒中的Benzonase底物是一種合成的DNA寡核苷酸探針,其一端具有VIC熒光基團,另一端具有BHQ1淬滅基團。這種設計使得在底物被切割后,VIC熒光不再被BHQ1淬滅,從而可以非常靈敏地檢測到Benzonase核酸酶活性。4.**高靈敏度的檢測范圍**:試劑盒能夠檢測到低達約0.002U(約0.003ng)的Benzonase或BeyoZonase,樣品中的Benzonase濃度約為0.0002U/μl或0.3pg/μl,這遠低于常規同類產品的檢測限。Recombinant Human FGFR2 beta (IIIb) Protein,hFc Tag
Probe qPCR Mix (2×):高效、特異的探針法qPCR解決方案Probe qPCR Mix (2×) 是一種為探針法實時熒光定量PCR(qPCR)設計的即用型預混液,廣應用于基因表達分析、病原體檢測、SNP分型和拷貝數變異分析等領域。該預混液基于TaqMan等探針技術,通過熒光信號的實時監測實現對目標DNA序列的高靈敏度定量分析。產品特點高特異性和靈敏度:采用熱啟動Taq DNA聚合酶和優化的反應緩沖體系,有效減少非特異性擴增,提高檢測靈敏度。快速反應:支持快速qPCR程序,可在短時間內完成檢測,提高實驗效率。防污染系統:部分產品含有dUTP/UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶),能夠有...