染料預混合的PCRMasterMix是一種特殊的PCR反應液,它在配方中已經預先加入了適合電泳分析的染料。這種設計使得PCR擴增后的產物可以直接用于凝膠電泳,無需額外添加上樣緩沖液,從而簡化了操作流程并減少了實驗時間。以下是一些關于染料預混合PCRMasterMix的特點:1.**方便性**:由于省去了擴增后添加上樣緩沖液的步驟,使得PCR到電泳的過渡更為簡便快捷。2.**一致性**:預混合的染料確保了每次PCR實驗中使用的染料濃度一致,有助于提高實驗結果的可重復性。3.**可視化**:一些染料預混合PCRMasterMix使用的染料在紫外光下具有明顯的熒光或顏色變化,有助于在電泳過程中實時監控DNA條帶的形成。4.**兼容性**:預混合的染料通常與各種類型的PCR儀器和電泳設備兼容。5.**穩定性**:預混合的染料在MasterMix中保持穩定,直到使用時才與DNA樣本接觸,減少了染料降解或失效的風險。6.**靈敏度**:某些染料具有較高的靈敏度,可以檢測到極少量的DNA,有助于提高PCR檢測的靈敏度。7.**安全性**:預混合的染料減少了操作過程中的接觸次數,降低了樣品交叉污染的風險。
PCR產物直接進行電泳分析通常涉及以下步驟:PCR擴增:首先使用PCR Master Mix和特定的引物對目標DNA片段進行擴增。PCR產物的準備:如果使用的是含有預混凝膠加載染料的PCR Master Mix(如某些Blood Direct PCR Master Mix),則PCR產物在擴增后已經含有了適合電泳的染料。如果沒有使用含染料的Master Mix,則需要在PCR反應完成后向產物中添加適量的凝膠加載染料。電泳槽的準備:清潔電泳槽,確保沒有灰塵或殘留物。安裝電泳板和梳子,注意密封以防緩沖液泄漏。灌注緩沖液:向電泳槽中灌注適量的電泳緩沖液,常用的緩沖液有1X TAE或1X TBE。PCR產物的加載:將PCR產物輕輕混合均勻,避免氣泡的產生。使用移液槍或微量移液管將PCR產物加入到凝膠孔中。如果PCR Master Mix中已含有染料,通常不需要額外添加。電泳條件的設置:根據PCR產物的大小和凝膠的濃度選擇合適的電壓和時間進行電泳。例如,較小的DNA片段可能需要較高的電壓,而較大的片段則可能需要較低的電壓和更長的時間。Recombinant Human PLA2G1B Protein,His Tag使用體外轉錄技術合成gRNA,確保gRNA的質量和純度,這對后續實驗的成功至關重要 。
pA-Tn5轉座酶是一種經過改造的高活性Tn5轉座酶,與ProteinA融合,形成一種新型融合酶,應用于CUT&Tag技術中,用于研究蛋白質與基因組DNA的相互作用。這種融合酶具備以下特點:1.**高活性**:pA-Tn5轉座酶是超高活性的突變形式,體外轉座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5轉座酶的N端結構域為ProteinA的一部分,可以與免疫球蛋白的Fc區相互作用,特別是與大多數哺乳動物的IgG結合。3.**Tn5轉座酶活性**:C端結構域為Tn5轉座酶,能夠特異性識別轉座子兩端反向重復的ME序列(MosaicEnd),并在形成轉座復合體后隨機插入靶DNA中。4.**應用廣**:適用于CUT&Tag技術、高通量測序建庫、ATAC-seq等,特別適用于早期胚胎發育、干細胞、以及表觀遺傳學等研究領域。5.**操作簡便**:pA-Tn5轉座酶的使用簡化了實驗步驟,可以在一步反應中實現DNA片段化和接頭連接,從細胞到二代測序文庫的轉化過程需9小時。6.**低細胞投入量**:CUT&Tag技術允許從低至60個細胞的樣本中獲得結果,甚至可以應用于單細胞水平的研究。7.**高質量結果**:pA-Tn5轉座酶的使用可以保證DNA片段化,同時獲得的蛋白純度高、核酸殘留低。
脫氧腺苷三磷酸(Deoxyadenosinetriphosphate,dATP)是一種去氧核苷酸三磷酸,它是DNA合成和復制過程中必需的原料之一。dATP的結構與腺苷三磷酸(ATP)相似,但dATP的五碳糖2號碳上缺少一個-OH基,取而代之的是一個氫原子。dATP是四種dNTPs(脫氧核糖核苷酸三磷酸)之一,四種dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP,它們分別對應DNA中的腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤和胸腺嘧啶。dATP的化學式為C10H16N5O12P3,分子量為491.182,CAS登錄號為1927-31-7。在實驗室中,dATP通常以100mM的濃度提供,用于各種分子生物學技術,如PCR、DNA測序和分子克隆技術。dATP溶液需要在低溫條件下保存,通常是-20℃,以保持其穩定性和活性。在DNA測序中,dATP與ddATP一起使用,ddATP是dATP的衍生物,它缺少3'-OH基團,用于Sanger測序中的鏈終止反應。在PCR中,dATP作為DNA聚合酶的底物,用于合成新的DNA鏈。dNTPs的濃度在PCR反應中非常重要,適當的濃度有助于減少錯配和提高擴增效率。通常,四種dNTPs以等濃度混合使用,以減少PCR過程中的錯配誤差。在某些情況下,根據目標序列的長度和組成,可能需要調整dNTPs的濃度,以優化PCR反應。Pfu DNA Polymerase 具有較高的保真度,能夠在DNA合成過程中減少錯誤摻入的堿基,降低非目標突變的發生率。
重組酶聚合酶擴增技術(RecombinasePolymeraseAmplification,簡稱RPA)是一種核酸擴增技術,能夠在等溫條件下快速檢測特定DNA序列。這項技術以其快速、靈敏度高、特異性強、對設備要求低等優點,在臨床快速診斷、食品檢測、防控、工業應用、現場實時檢測等領域具有廣泛的應用潛力。**技術原理**:RPA技術主要依賴于幾種關鍵的酶和蛋白質:-**重組酶**:能夠識別并結合到單鏈核酸(寡核苷酸引物)上。-**單鏈DNA結合蛋白(SSB)**:與被置換的單鏈DNA結合,防止其重新結合形成雙鏈。-**鏈置換DNA聚合酶**:在引物定位同源序列后,進行鏈延伸,實現DNA的指數增長。RPA的工作原理是,重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成,對模板上的目標區域進行指數式擴增。整個過程進行得非常快,一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。**技術優勢**:-**快速性**:RPA可以在37-42°C的等溫條件下快速完成核酸的擴增,通常在10到30分鐘內即可完成。-**靈敏度和特異性**:RPA能夠檢測低至單拷貝的核酸模板,并具有高特異性。
將含有重組質粒的表達載體轉化到宿主細胞中,通常是大腸桿菌或其他合適的細胞系。Reaction buffer and ATP-Mg
T4UvsX重組酶的保存和純化是實驗室工作流程中的重要環節,確保了酶的穩定性和活性。以下是根據搜索結果提供的信息:保存條件:-T4UvsX重組酶通常在-20°C的條件下保存,可以保持3年的有效期。-某些產品說明中提到,該制品不含甘油,可用于建立凍干體系,這可能對長期保存和運輸有額外的好處。-建議避免反復凍融,因為這可能會影響酶的活性。純化過程:-T4UvsX重組酶是由大腸桿菌表達和純化的。這意味著科學家首先將T4噬菌體的uvsX基因克隆到適合在大腸桿菌中表達的質粒載體中。-然后將這個質粒轉化到大腸桿菌宿主細胞中,使其表達T4UvsX蛋白。-接下來,通過一系列生化步驟從大腸桿菌細胞中提取和純化T4UvsX蛋白,這些步驟可能包括細胞裂解、離心、層析等技術。注意事項:-T4UvsX重組酶的保存液中甘油含量為20%,建議單獨分裝保存,以避免反復凍融。-該酶無核酸酶活性,這表明它在催化反應時不會切割DNA鏈,而是促進DNA鏈的重組。-本產品用于科研用途,不應用于臨床診斷。應用:-T4UvsX重組酶主要用于等溫擴增技術,如重組酶聚合酶擴增(RPA),這是一種快速、靈敏的核酸檢測技術。通過遵循這些保存和純化指南,研究人員可以確保T4UvsX重組酶在實驗中的有效性和可靠性。Reaction buffer and ATP-Mg
Probe qPCR Mix (2×):高效、特異的探針法qPCR解決方案Probe qPCR Mix (2×) 是一種為探針法實時熒光定量PCR(qPCR)設計的即用型預混液,廣應用于基因表達分析、病原體檢測、SNP分型和拷貝數變異分析等領域。該預混液基于TaqMan等探針技術,通過熒光信號的實時監測實現對目標DNA序列的高靈敏度定量分析。產品特點高特異性和靈敏度:采用熱啟動Taq DNA聚合酶和優化的反應緩沖體系,有效減少非特異性擴增,提高檢測靈敏度。快速反應:支持快速qPCR程序,可在短時間內完成檢測,提高實驗效率。防污染系統:部分產品含有dUTP/UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶),能夠有...