BsuDNAPolymerase(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶)在PCR中的應用具有多個優勢,以下是一些關鍵點:1.**鏈置換活性**:BsuDNAPolymerase具有很強的鏈置換活性,這使得它非常適合于等溫擴增技術,如重組酶聚合酶擴增(RPA)。在這些技術中,BsuDNAPolymerase可以快速、高效、特異性地擴增模板,在10到30分鐘內將痕量的核酸模板(低至單拷貝)擴增至可以檢出的水平。2.**高溫穩定性**:BsuDNAPolymerase在高溫下保持活性,這使得它在一些需要高溫反應的實驗條件下表現出色。3.**高靈敏度和特異性**:BsuDNAPolymerase在等溫擴增中展現出高靈敏度,能夠將微量核酸模板擴增到可檢測水平。同時,它也具有高特異性,減少了非特異性擴增的風險。4.**簡化的樣品處理**:BsuDNAPolymerase可以直接對復雜樣品進行擴增,無需事先進行復雜的核酸純化和提取步驟,節省了時間和成本。5.**可擴增DNA和RNA**:BsuDNAPolymerase不僅可以擴增DNA,還可以直接擴增RNA,省去了額外的逆轉錄反應(cDNA合成)步驟,這對于RNA的檢測和分析更加方便快捷。6.**無核酸外切酶和RNase殘留**:BsuDNAPolymerase在生產過程中確保無核酸外切酶、切口酶及RNase殘留,這有助于提高實驗的準確性和重復性。使用 Tn5 轉座酶可以保證 DNA的 片段化的質量,同時獲得的蛋白純度高、核酸殘留低,能夠為后續的實驗。Recombinant Cynomolgus IL-1R3/IL-1 RAcP Protein,His Tag
BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶在分子生物學實驗中都是常用的酶,但它們之間存在一些關鍵的不同點:1.**來源和熱穩定性**:-**TaqDNA聚合酶**來源于嗜熱菌Thermusaquaticus,具有很好的耐熱性,能夠承受PCR的熱變性步驟。-**BstDNA聚合酶**來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus),同樣具有較高的熱穩定性,適用于等溫擴增,如LAMP技術,無需PCR熱循環。2.**酶活性**:-**TaqDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和5'-3'外切酶活性,但沒有3'-5'外切酶活性。這意味著它在DNA合成過程中可以校正一些錯誤,但保真性相對較低。-**BstDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和強鏈置換活性,但缺乏5'-3'外切酶活性。這使得它在等溫擴增中更為有效,尤其是在需要高保真度和快速擴增的應用中。3.**應用領域**:-**TaqDNA聚合酶**主要用于PCR技術,適用于各種DNA片段的擴增,包括復雜模板和長片段的擴增。-**BstDNA聚合酶**特別適用于等溫擴增技術,如LAMP,這些技術不需要溫度循環,適用于快速、低成本的DNA擴增。4.**擴增速度和效率**:-**BstDNA聚合酶**在等溫擴增中顯示出比傳統TaqDNA聚合酶更快的擴增速度和更高的產量,尤其是在優化的LAMP反應中。
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一種利用磁珠技術從血液中提取基因組DNA的試劑盒。以下是一些關鍵特點和應用:1.**高效提取**:該試劑盒采用特殊的磁珠和緩沖體系,能夠快速且高效地從100μl至1ml的血液中分離和純化高質量的基因組DNA。2.**磁珠特性**:獨特的磁珠具有很強的核酸親和力,在特定條件下可以快速分離和純化核酸。這些磁珠對磁場響應迅速,使得提取過程既安全又便捷。3.**提取過程**:血液樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,釋放出的基因組DNA與磁珠特異性結合。通過磁分離架的作用,磁珠與溶液快速分離,經過洗滌去除雜質,用洗脫液將基因組DNA從磁珠上洗脫下來。4.**應用廣**:提取的基因組DNA可用于多種分子生物學實驗,如PCR擴增、酶切、基因分型、Southern雜交、高通量測序、基因組DNA文庫構建等。5.**操作簡便**:整個抽提過程大約需要50分鐘,操作簡便,無需使用有毒有害的有機試劑,如酚或氯仿,提高了實驗的安全性。6.**高純度和高回收率**:提取的DNA純度高,A260/A280通常在1.7-1.9之間,表明蛋白和RNA的污染低。回收率通常超過80%。
T7EndonucleaseI(T7EI)是一種特殊的DNA內切酶,具有以下特點:1.**識別錯配DNA**:T7EI能夠識別并切割不完全配對的DNA、十字型結構DNA、Holliday結構或交叉DNA以及異源雙鏈DNA。2.**切割位點**:T7EI切割錯配位點5'端的、第二或第三個磷酸二酯鍵。3.**靈敏度**:T7EI對錯配DNA的識別非常靈敏,能夠檢測并切割單堿基和多堿基的錯配。4.**應用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因編輯技術導致的基因突變的鑒定。它通過識別錯配DNA來幫助鑒定基因編輯是否成功以及是否有非目標效應。5.**直接電泳檢測**:T7EI的產物可以直接通過電泳進行檢測,這使得它在實驗操作中更為方便。6.**來源**:T7EI來源于大腸桿菌菌株,是一種麥芽糖結合蛋白(MBP)和T7核酸內切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:盡管T7EI在商業上使用時成本較高,但它在大規模樣本測試中,尤其是在基因突變鑒定方面,提供了一種有效的篩選方法。8.**特殊注意事項**:T7EI能夠識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導致的錯配DNA,但不能識別1bp的插入、缺失或突變。這些特點使得T7EndonucleaseI成為基因突變鑒定中一個非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因編輯技術的應用中。牛痘DNA拓撲異構酶I具有解超螺旋的活性,可以解開雙鏈閉合環狀DNA的超螺旋結構,便于后續的酶切反應。
使用BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads(血液基因組DNA提取試劑盒,磁珠法)進行血液樣本中基因組DNA的提取,主要步驟如下:1.**實驗準備**:準備抗凝全血樣本(如EDTA抗凝血),移液器及無菌,15ml離心管,無水乙醇,70%乙醇,干凈的吸水紙,渦旋振蕩器,金屬浴/水浴,臺式離心機等。2.**樣本處理**:取適量血液樣本,根據試劑盒要求,可能需要將血液體積調整至特定量,例如200μl,并可能需要加入PBS緩沖液。3.**裂解血液細胞**:向血液樣本中加入蛋白酶K和細胞裂解液,渦旋混勻后,置于金屬浴或水浴中進行裂解,通常在65°C孵育10-15分鐘,并在此期間定期混勻。4.**DNA與磁珠結合**:向裂解后的樣本中加入異丙醇和磁珠懸浮液,渦旋混勻后,室溫放置一段時間,以便于基因組DNA與磁珠結合。5.**磁珠分離**:將樣本置于磁力架上,待磁珠聚集后,小心移除上清液,去除雜質。6.**洗滌磁珠**:向磁珠中加入漂洗液和洗滌液,進行洗滌以去除殘留的蛋白質和鹽分,然后再次使用磁力架分離磁珠,移除洗滌液。
通過工程化改造,如將FnCas12a與單鏈DNA外切酶融合,可以提高基因編輯效率,擴大FnCas12a可以靶向的范圍 。Recombinant Cynomolgus IL-1R3/IL-1 RAcP Protein,His Tag
5'-3'外切核酸酶活性是指DNA聚合酶能夠從DNA鏈的5'端向3'端切除核苷酸的能力。這種活性通常用于修復受損的DNA或去除錯誤配對的核苷酸。具體來說,5'-3'外切核酸酶活性可以在DNA合成過程中切除前方的核苷酸,幫助錯誤或不需要的序列,從而確保DNA的正確復制和修復。在DNA聚合酶中,5'-3'外切核酸酶活性與聚合酶活性相輔相成。聚合酶在合成新鏈時,5'-3'外切酶活性可以在發現錯誤時進行修正,確保合成的DNA鏈的準確性。例如,E.coliDNA聚合酶I具有這種外切酶活性,可以在合成過程中去除錯誤的核苷酸,從而提高DNA的保真度。需要注意的是,BstDNAPolymerase,LargeFragment不具有5'-3'外切核酸酶活性,這使得它在某些應用中更為穩定,特別是在等溫擴增反應中,如LAMP(環介導等溫擴增)和RCA(滾環擴增)等。Recombinant Cynomolgus IL-1R3/IL-1 RAcP Protein,His Tag
Probe qPCR Mix (2×):高效、特異的探針法qPCR解決方案Probe qPCR Mix (2×) 是一種為探針法實時熒光定量PCR(qPCR)設計的即用型預混液,廣應用于基因表達分析、病原體檢測、SNP分型和拷貝數變異分析等領域。該預混液基于TaqMan等探針技術,通過熒光信號的實時監測實現對目標DNA序列的高靈敏度定量分析。產品特點高特異性和靈敏度:采用熱啟動Taq DNA聚合酶和優化的反應緩沖體系,有效減少非特異性擴增,提高檢測靈敏度。快速反應:支持快速qPCR程序,可在短時間內完成檢測,提高實驗效率。防污染系統:部分產品含有dUTP/UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶),能夠有...