在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,PCR技術(shù)是基因擴(kuò)增的重要工具,而Phusion Master Mix (2×) (Without Dye) 則是實(shí)現(xiàn)高保真、高效擴(kuò)增的理想選擇。這種預(yù)混液結(jié)合了Phusion DNA聚合酶的保真性與優(yōu)化的反應(yīng)體系,為科研人員提供了一個(gè)便捷、可靠的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。Phusion Master Mix (2×) (Without Dye) 是一種即用型的2倍濃度預(yù)混液,包含Phusion DNA聚合酶、dNTPs、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液以及必要的輔助成分。Phusion DNA聚合酶以其高保真性著稱,其錯(cuò)誤率比普通Taq酶低50倍以上,比Pfu酶低6倍。這種高保真性使其成為基因克隆、測序模板制備、突變分析等高精度實(shí)驗(yàn)的優(yōu)先工具。此外,Phusion酶的延伸速度可達(dá)15-30秒/kb,比傳統(tǒng)Pfu酶快10倍,明顯提高了實(shí)驗(yàn)效率。預(yù)混液的無染料配方為實(shí)驗(yàn)提供了更大的靈活性。實(shí)驗(yàn)人員可以根據(jù)具體需求選擇后續(xù)的檢測方法,例如凝膠電泳分析、平末端克隆或測序,而無需擔(dān)心染料對(duì)結(jié)果的干擾。這種無染料設(shè)計(jì)特別適合需要進(jìn)一步處理的PCR產(chǎn)物,例如用于構(gòu)建重組質(zhì)粒或進(jìn)行下游功能分析。Phusion Master Mix (2×) (Without Dye) 的2倍濃度設(shè)計(jì)進(jìn)一步簡化了實(shí)驗(yàn)操作。實(shí)驗(yàn)人員只需加入模板DNA和引物,即可直接進(jìn)行反應(yīng),減少了手動(dòng)配制反應(yīng)體系的步驟和可能出現(xiàn)的誤差。Phusion DNA Polymerase的反應(yīng)條件穩(wěn)健,幾乎無需優(yōu)化,即使在存在PCR抑制劑的情況下也能表現(xiàn)出色。Recombinant Human MSLN/Mesothelin(hFc Tag)
robe qPCR Mix (2×, High ROX):高特異性與強(qiáng)校正能力的qPCR解決方案Probe qPCR Mix (2×, High ROX) 是一種為實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)設(shè)計(jì)的即用型預(yù)混液,特別適用于需要高濃度ROX校正染料的qPCR儀器。該預(yù)混液結(jié)合了熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、dNTPs以及高濃度ROX,能夠?qū)崿F(xiàn)高效、特異的基因定量檢測。產(chǎn)品特點(diǎn)高特異性和靈敏度:采用熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶,結(jié)合抗體或化學(xué)修飾技術(shù),有效減少非特異性擴(kuò)增,提高檢測靈敏度。高濃度ROX校正:含有高濃度ROX染料,適用于需要高濃度ROX作為校正染料的qPCR儀器,如ABI 7000、7900HT等。防污染系統(tǒng):部分產(chǎn)品含有dUTP和UNG(尿嘧啶DNA糖基化酶),能夠有效降解含尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,防止假陽性。快速反應(yīng):支持快速qPCR程序,可在短時(shí)間內(nèi)完成檢測,提高實(shí)驗(yàn)效率。操作簡便:2×預(yù)混液設(shè)計(jì),只需加入引物、探針和模板即可進(jìn)行反應(yīng),減少了操作步驟和污染風(fēng)險(xiǎn)。應(yīng)用場景基因表達(dá)分析:用于定量檢測特定基因的表達(dá)水平。病原體檢測:快速檢測病毒、細(xì)菌等病原體的DNA。SNP分型和拷貝數(shù)變異分析:通過探針法實(shí)現(xiàn)高特異性的基因分型。多重qPCR:可在同一反應(yīng)中同時(shí)檢測多個(gè)目標(biāo)基因。
racil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) (1U/μl):高效防污染的熱敏型酶Uracil-DNA Glycosylase (Heat-labile, Cod) 是一種來源于鱈魚的熱敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG/UNG),能夠特異性地催化水解DNA鏈中的尿嘧啶堿基,釋放游離尿嘧啶,從而防止PCR產(chǎn)物的氣溶膠污染。產(chǎn)品特點(diǎn)該酶對(duì)單鏈和雙鏈DNA均具有活性,但對(duì)RNA無作用。其比較大特點(diǎn)是熱敏感性,可在55℃下10分鐘內(nèi)完全失活,避免了常規(guī)UDG酶滅活后可能殘留的活性對(duì)含dU擴(kuò)增產(chǎn)物的降解作用。這種特性使其在PCR和RT-qPCR反應(yīng)中表現(xiàn)出色,尤其適用于需要快速滅活的場景。應(yīng)用場景去除PCR產(chǎn)物污染:通過降解含尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,防止氣溶膠污染導(dǎo)致的假陽性結(jié)果。RT-qPCR防污染:在逆轉(zhuǎn)錄前去除殘留的PCR產(chǎn)物,避免假陽性。單鏈或雙鏈DNA處理:用于去除DNA中的尿嘧啶堿基。在PCR反應(yīng)中,建議在反應(yīng)體系中加入1 U/50 μL的UDG/UNG,以確保完全去除含dU的模板。此外,該酶在多數(shù)PCR反應(yīng)緩沖液中均有活性,但在高離子強(qiáng)度(>200 mM)下會(huì)被抑制。
在現(xiàn)代分子生物學(xué)研究中,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)技術(shù)已成為基因表達(dá)分析、病原體檢測、基因拷貝數(shù)變異研究等領(lǐng)域的工具。而One Step RT-qPCR Probe Kit憑借其產(chǎn)品特點(diǎn)和性能,為科研工作者提供了一種高效、可靠的解決方案,極大地推動(dòng)了相關(guān)研究的進(jìn)展。一、產(chǎn)品特點(diǎn)(一)一步法操作One Step RT-qPCR Probe Kit采用獨(dú)特的一步法反應(yīng)體系,將逆轉(zhuǎn)錄(RT)和qPCR反應(yīng)集成在一個(gè)反應(yīng)體系中。這種設(shè)計(jì)極大地簡化了實(shí)驗(yàn)操作流程,減少了人為操作誤差和樣本污染的風(fēng)險(xiǎn)。相比傳統(tǒng)的兩步法,一步法節(jié)省了時(shí)間和人力成本,還提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和穩(wěn)定性,尤其適合高通量樣本的檢測。(二)高靈敏度與特異性該試劑盒采用了先進(jìn)的探針技術(shù),結(jié)合優(yōu)化的酶體系和反應(yīng)緩沖液,能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)低豐度靶標(biāo)基因的高靈敏度檢測。其特異性探針設(shè)計(jì)確保了與目標(biāo)序列結(jié)合,避免了非特異性擴(kuò)增的干擾,從而為定量分析提供了準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)支持。無論是對(duì)微量樣本中的基因表達(dá)進(jìn)行定量,還是對(duì)低濃度病原體進(jìn)行檢測,One Step RT-qPCR Probe Kit都能表現(xiàn)出性能。對(duì)于20 kb以上的長片段擴(kuò)增,建議適當(dāng)延長退火/延伸時(shí)間,并根據(jù)需要調(diào)整Mg2?和dNTP濃度。
高靈敏度與特異性該試劑采用熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶,結(jié)合抗體封閉技術(shù),有效避免了低溫條件下的非特異性擴(kuò)增,提高了反應(yīng)的特異性和靈敏度。探針法qPCR通過熒光探針與目標(biāo)基因的特異性結(jié)合,避免了非特異性產(chǎn)物的干擾,檢測靈敏度和特異性高于傳統(tǒng)的SYBR Green方法。低濃度ROX校正染料試劑中含有低濃度ROX作為被動(dòng)參考染料,能夠有效校正孔間熒光信號(hào)的差異,減少因移液誤差或樣品蒸發(fā)等因素引起的熒光波動(dòng),確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性。UDG防污染系統(tǒng)內(nèi)置UDG(Uracil-DNA Glycosylase)防污染系統(tǒng),通過降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,有效防止了實(shí)驗(yàn)室中殘留的PCR產(chǎn)物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾,避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。快速擴(kuò)增與多重檢測優(yōu)化的反應(yīng)體系支持快速擴(kuò)增程序,可在短時(shí)間內(nèi)完成高靈敏度檢測,同時(shí)適用于多重PCR檢測,可在單個(gè)反應(yīng)孔中同時(shí)檢測多個(gè)基因。適用性該試劑適用于多種樣本類型,包括cDNA、基因組DNA等,尤其適合低豐度基因的定量檢測,如低表達(dá)的mRNA、lncRNA、小RNA等。Hot-Start Taq DNA Polymerase 是一種經(jīng)過改良的Taq DNA聚合酶,通過結(jié)合熱啟動(dòng)技術(shù),提高了PCR反應(yīng)的特異性。Recombinant Human Ubiquitin Conjugating Enzyme E2D1(UBE2D1)
AdvanceFast PCR Master Mix (2×) (With Dye) 廣泛應(yīng)用于常規(guī)PCR、基因克隆、復(fù)雜模板擴(kuò)增以及高通量建庫等場景。Recombinant Human MSLN/Mesothelin(hFc Tag)
一、強(qiáng)大的耐受性和兼容性Plant Direct PCR Master Mix (2×)(Without Dye) 使用了經(jīng)過定向進(jìn)化改造的DNA聚合酶,這種酶對(duì)植物樣本中的多糖、多酚等PCR抑制物具有極強(qiáng)的耐受性。即使在樣本經(jīng)過簡單裂解后,也能高效地進(jìn)行DNA擴(kuò)增,適用于多種植物物種,包括擬南芥、小麥、水稻和玉米等。此外,該預(yù)混液的擴(kuò)增性能好,能夠擴(kuò)增長達(dá)5 kb的DNA片段,適用于各種植物樣本的直接擴(kuò)增。二、快速便捷的操作流程該預(yù)混液為2倍濃度的反應(yīng)體系,包含DNA聚合酶、dNTPs、Mg2?和優(yōu)化的緩沖體系,只需加入模板和引物即可進(jìn)行反應(yīng)。其獨(dú)特的裂解緩沖液能夠在短時(shí)間內(nèi)裂解植物組織,釋放出可用于PCR的基因組DNA。這種“直接擴(kuò)增”的方式不僅節(jié)省了時(shí)間,還減少了因DNA提取過程中的損失和污染。三、穩(wěn)定性和重復(fù)性Plant Direct PCR Master Mix (2×)(Without Dye) 經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制,即使在反復(fù)凍融50次后,活性仍保持穩(wěn)定。其優(yōu)化的配方和穩(wěn)定的酶體系確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的高度重復(fù)性,適合高通量篩選和大規(guī)模樣本分析。Recombinant Human MSLN/Mesothelin(hFc Tag)
Pfu DNA聚合酶是一種從嗜熱古細(xì)菌 Pyrococcus furiosus 中提取的高保真DNA聚合酶,因其準(zhǔn)確性和熱穩(wěn)定性而被廣應(yīng)用于分子生物學(xué)研究。Pfu DNA聚合酶具有5'-3' DNA聚合酶活性和3'-5'外切酶活性,這種獨(dú)特的校正功能使其能夠在DNA合成過程中糾正錯(cuò)誤摻入的堿基,從而提高擴(kuò)增的保真性。與Taq DNA聚合酶相比,Pfu酶的錯(cuò)誤率更低,其保真性是Taq酶的10倍以上。這種高保真性使其成為需要準(zhǔn)確擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)(如基因克隆、突變研究和測序準(zhǔn)備)的理想選擇。此外,Pfu DNA聚合酶具有出色的熱穩(wěn)定性,能夠在95°C的高溫下保持活性,適合PCR反應(yīng)的高溫變性步驟。其擴(kuò)增產(chǎn)...